Поделиться Поделиться

ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

ТЕМА: СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С УЧАСТИЕМ КОМПЛЕМЕНТА. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕЧЕНЫХ КОМПОНЕНТОВ. РАДИОАКТИВНЫЕ, ФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЕ, ФЕРМЕНТНЫЕ МЕТКИ.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Реакции иммунного лизиса и связывания комплемента: методика постановки, учета и оценки, применение в диагностике инфекционных заболеваний.

2. Реакции иммунофлюоресценции. Диагностическое значение, информативность, варианты постановки реакций: прямой и непрямой.

3. Иммуноферментный анализ. Варианты постановки. Возможные ошибки и ограничения метода, иммуноферментного анализа.

4. Иммуноблотинг (вестерн- блотинг). Проведение и учет результатов. Варианты применения метода.

5. Радиоиммунный анализ, сущность, способы постановки, методы учета и оценки реакций, достоинства и недостатки метода.

ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

1. Реакция иммунного бактериолиза (РИБ) - лизис бактерий в присутствие специфических антител и комплемента (использовали для диагностики холеры, сифилиса и лептоспироза)

Ингредиенты РИБ:антиген (представлен на клеточной стенке бактерий); б) антитела (в данном случае их называют бактериолизины) иммунной сыворотки в) комплемент

Исследуемый материал:сыворотка крови пациента при подозрении на заболевание

Диагностические препараты: 1. Взвесь суточной культуры известных бактерий – диагностикум из живых бактерий (лептоспир) содержит антиген (представлен на клеточной стенке бактерий) 2. Комплемент – коммерческий препарат получают из сыворотки крови морских свинок

Варианты постановки: in vitro (в пробирках ) и in vivo (на морских свинках).

Ингредиенты опыт контроль
антигена комплемента
Сыворотка крови обследуемого прогретая при 56º 30 мин 1:10 0,5 0,5 -
Антиген из живых лептоспир ~ 1 млрд. бактерий в 1 мл 0,1 0,1 0,1
Комплемент 0,1 - 0,1
Физиологический р-р   0,1 0,5
Результат: лизис +/- Лизис+ Лизис- Лизис-

В настоящее время используют для толькоin vitro и только для диагностики лептоспирозов. Для этого к 0,2 мл разведенной сыворотки (1:100, 1:200 ,1:400,1:800 и т.д) обследуемого добавляют 0,2 мл взвеси культуры лептоспир инкубируют 2 часа в термостате и микроскопируют в темном поле. Лизис характеризуется сильным набуханием и зернистостью лептоспир, потерей подвижности с последующим распадом на отдельные зерна, которые иногда полностью растворяются. Лизис лептоспир сывороткой крови обследуемого пациета в титрах 1:200 и выше позволяет подтвердить диагноз лептоспироза (Leptospira interrogans)

2. Реакция иммунного гемолиза - лизис эритроцитов в присутствие специфических антител и комплемента

Ингредиенты реакции гемолиза: 1. 3% взвесь эритроцитов барана (антиген); 2. Гемолитическая сыворотка - (гемолизин) антитела против эритроцитов барана готовят на производстве, иммунизируя кролика эритроцитами барана, затем сыворотку лиофилизируют и на этикетке указывают титр

3. Комплемент – коммерческий препарат получают из сыворотки крови морских свинок

Цель применения: определение титра комплемента - наибольшего разведения комплемента, который вызывает полный гемолиз эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки

Ингредиенты Номер пробирки Контроль
КГС КЭ
Комплемент в разведении 1:10 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 - -
Физиологический раствор 1,45 1,4 1,35 1,3 1,25 1,2 1,15 1,1 1,05 1,0 - -
Гемолитическая система 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
Результ: Гемолиз +/- ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 1 Гем+ ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 1 Гем+ ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 3 Гем+ ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 3 Гем+ ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 3 Гем+ ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 6 Гем- ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 6 Гем- ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 6 Гем- ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 6 Гем- ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 6 Гем- ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 6 Гем- ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА - Инвестирование - 6 Гем
Титр комплемента                        

Титрование комплемента тип реакции реакция иммунного гемолизаВывод: Титр комплемента составляет 0,25 мл Рабочая доза комплемента на 20-25% выше титра (обычно берут предыдущее разведение), равна 0,2

← Предыдущая страница | Следующая страница →