Поделиться Поделиться

Культивирование и индикация вирусов

Культивирование вирусов человека и животных проводят с целью лабораторной диагностики

вирусных инфекций, для изучения вопросов патогенеза и иммунитета, получения

диагностических и вакцинных препаратов, применяют в научно-исследовательской работе.

Поскольку вирусы являются абсолютными паразитами, их культивируют или на уровне

организма, или на уровне живых клеток, выращиваемых вне организма в искусственных

условиях. В качестве биологических моделей для культивирования используют лабораторных животных, развивающиеся куриные эмбрионы и культуры клеток.

Лабораторные животные (белые мыши, хлопковые крысы, і кролики, хомяки, обезьяны и др.) в начальный период развития вирусологии были единственной экспериментальной биологической моделью, которую использовали для размножения и 1 изучения свойств вирусов. На основании развития типичных признаков заболевания и патоморфологических изменений органов I животных можно судить о репродукции вирусов, т. е. проводить 1 индикацию вирусов. В настоящее время применение этой модели для диагностики ограничено из-за невосприимчивости животных ко многим вирусам человека.

Куриные эмбрионы предложены в качестве экспериментальной модели для культивирования

вирусов в середине 30-х годов I ф. Бернетом. К достоинствам модели относятся возможность

накопления вирусов в больших количествах, стерильность объекта, отсутствие скрытых

вирусных инфекций, простота техники работы. Для культивирования вирусов исследуемый

материал вводят в различные полости и ткани куриного зародыша.

Индикацию вирусов осуществляют по характеру специфических поражений оболочек и тела

эмбриона, а также феномену гемагглютинации . склеиванию эритроцитов. Явление гемагглютинации впервые было обнаружено в 1941 г. при культивировании в куриных эмбрионах вирусов гриппа. Позднее было установлено, что гемагглютинирующими свойствами обладают

многие вирусы. На основе этого феномена была разработана техника реакции гемагглютинации (РГА) вне организма (in vitro), I которая широко применяется для лабораторной диагностики вирусных инфекций. Куриные эмбрионы не являются универсальной биологической моделью для вирусов. Почти неограниченные возможности появились у вирусологов после открытия метода выращивания культур клеток.

Метод культур клеток . выращивание различных клеток и 1 тканей вне организма на

искусственных питательных средах -разработан в 50-х годах Дж. Эндерсом и сотр.

Подавляющее большинство вирусов способно размножаться на культурах клеток. Для :

приготовления культур клеток используют самые разнообразные j ткани человека, животных и птиц. Большое распространение получили культуры клеток из эмбриональных и опухолевых (злокачественно перерожденных) тканей, обладающих по сравнению с нормальной тканью взрослого организма более активной способностью к росту и размножению.В зависимости от техники приготовления и культивирования различают три основных типа культур клеток и тканей: однослойные культуры клеток; культуры суспензированных клеток; органные культуры.

Наибольшее практическое применение получили однослойные культуры, растущие на

поверхности стекла лабораторной посуды в виде монослоя клеток (рис.3.4, а). Однослойные культуры клеток в зависимости от числа жизнеспособных генераций в свою очередь подразделяются на первичные, или первично трипсинизированные (способны размножаться однократно), перевиваемые,или стабильные (способны перевиваться в лабораторных условиях в течение неопределенно длительного срока), и полуперевиваемые (способны размножаться в течение 40.50 пассажей).; Культуры суспензированных клеток растут и размножаются во взвешенном состоянии при постоянном интенсивном перемешивании среды. Они могут быть использованы для накопления большого количества вирусов. Некоторые вирусы лучше размножаются в органных культурах, которые представляют собой кусочки органов животного или человека, выращиваемых вне организма и сохраняющих свойственную данному органу структуру. I В зависимости от свойств вируса подбирают наиболее чувствительную к данному вирусу культуру клеток, на которой возможна I его репродукция.О размножении вирусов в культуре клеток свидетельствуют I следующие признаки:А цитопатический эффект;А образование в клетках включений;

А образование бляшек;А феномен гемадсорбции;А ²цветная⌡ реакция.

Цитопатический эффект (ЦПЭ) . видимые под микроскопом морфологические изменения клеток вплоть до их гибели, 1 возникающие в результате повреждающего действия вирусов (рис. I 3.4, б). Характер ЦПЭ, вызванного разными вирусами, неодинаков. Включения представляют собой скопления вирусных частий, вирусных белков или клеточного материала, которые можно обнаружить в ядре или цитоплазме клеток при специальных методах окраски (рис. 3.5). Бляшки, или ²негативные колонии вирусов, . участки разрушенных вирусами клеток; их можно обнаружить при культивировании вирусов на

однослойных клеточных культурах, покрытых тонким слоем агара (рис. 3.6). Бляшки,

образуемые разными вирусами, отличаются по величине, форме, времени появления, поэтому феномен бляшко-образования используют для дифференциации вирусов. Реакция гемадсорбции . способность клеточных культур, зараженных вирусом, адсорбировать на своей поверхности эритроциты. Механизмы реакций гемадсорбции и гемагглютинации сходны. Многие вирусы обладают гемадсорбирующими свойствами. ²Цветная⌡ реакция основана на разнице в цвете индикатора питательной среды, используемой для культур клеток. При росте клеток, не пораженных вирусом, накапливаются продукты метаболизма, что приводит к изменению цвета индикатора питательной среды. При репродукции вирусов в культуре нарушается нормальный метаболизм клеток и среда сохраняет первоначальный цвет.

Бактериофаги

Бактериофаги (от ²бактерия⌡ и греч. phagos . пожиратель) . вирусы бактерий, обладающие

способностью специфически проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и

вызывать их растворение (лизис).

История открытия бактериофагов связана с именем канадского исследователя Ф. д'Эрелля

(1917), который обнаружил эффект лизиса бактерий, выделенных из испражнений больного

дизентерией. Такие явления наблюдали и другие микробиологи [Гамалея Н. Ф., 1898; Туорт

Ф., 1915], но лишь Ф. д'Эрелль, предположив, что имеет дело с вирусом, выделил

этот ²литический фактор⌡ с помощью бактериальных фильтров и назвал его бактериофагом.

В дальнейшем выяснилось, что бактериофаги широко распространены в природе. Их обнаружили

в воде, почве, пищевых продуктах, различных выделениях из организма людей и животных,

т.е. там, где встречаются бактерии. В настоящее время эти вирусы выявлены у большинства

бактерий, как болезнетворных, так и неболезнетворных, а также ряда других

микроорганизмов (например, грибов). Поэтому в широком смысле их стали называть

просто фагами.

Фаги различаются по форме, структурной организации, типу

нуклеиновой кислоты и характеру взаимодействия с микробной клеткой.

Морфология. Большинство фагов под электронным микроскопом имеют форму головастика или

сперматозоида, некоторые . кубическую и нитевидную формы. Размеры фагов колеблются от 20

до 800 нм у нитевидных фагов.

Наиболее полно изучены крупные бактериофаги, имеющие форму сперматозоида. Они состоят из

вытянутой икосаэдричес-кой головки размером 65.100 нм и хвостового отростка длиной более

100 нм (рис. 3.7). Внутри хвостового отростка имеется полый цилиндрический стержень,

сообщающийся отверстием с головкой, снаружи . чехол, способный к сокращению наподобие

мышцы. Хвостовой отросток заканчивается шестиугольной базальной пластинкой с короткими

шипами, от которых отходят нитевидные структуры . фибриллы.

Существуют также фаги, имеющие длинный отросток, чехол которого не способен сокращаться,

фага с короткими отростками, аналогами отростков, без отростка.

Химический состав. Фаги состоят из двух основных химических компонентов . нуклеиновой

кислоты (ДНК или РНК) и белка. У фагов, имеющих форму сперматозоида, двунитчатая ДНК

плотно упакована в виде спирали внутри головки.

Белки входят в состав оболочки (капсида), окружающей нукле-

иновую кислоту, и во все структурные элементы хвостового отростка. Структурные белки

фага различаются по составу полипептидов и представлены в виде множества идентичных

субъединиц, уложенных по спиральному или кубическому типу симметрии.

Кроме структурных белков, у некоторых фагов обнаружены внутренние (геномные) белки,

связанные с нуклеиновой кислотой, и белки-ферменты (лизоцим, АТФ-аза), участвующие во

взаимодействии фага с клеткой.

Резистентності⌡. Фаги более устойчивы к действию химических и физических факторов, чем

бактерии. Ряд дезинфицирующих веществ (фенол, этиловый спирт, эфир и хлороформ) не

оказывают существенного влияния на фаги. Высокочувствительны фаги к формалину и

кислотам. Инактивация большинства фагов наступает при температуре 65.70 .С. Длительное

время они сохраняются при высушивании в запаянных ампулах, замораживании при

температуре .185 .С в глицерине.

Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. По механизму взаимодействия различают

вирулентные и умеренные фаги. Вирулентные фаги, проникнув в бактериальную клетку,

автономно репродуцируются в ней и вызывают лизис бактерий. Процесс взаимодействия

вирулентного фага с бактерией протекает в виде нескольких стадий и весьма схож с

процессом взаимодействия вирусов человека и животных с клеткой хозяина (см. 3.5.1).

Однако для фагов, имеющих хвостовой отросток с сокращающимся чехлом, он имеет

особенности. Эти фаги адсорбируются на поверхности бактериальной клетки с помощью

фибрилл хвостового отростка. В результате активации фагового фермента АТФазы происходит

сокращение чехла хвостового отростка и внедрение стержня в клетку. В

процессе ²прокалывания⌡ клеточной стенки бактерии принимает участие фермент лизоцим,

находящийся на конце хвостового отростка. Вслед за этим ДНК фага, содержащаяся в

головке, проходит через полость хвостового стержня и активно впрыскивается в цитоплазму

клетки. Остальные структурные элементы фага (капсид и отросток) остаются вне клетки.

После биосинтеза фаговых компонентов и их самосборки в бактериальной клетке

накапливается до 200 новых фаговых частиц. Под действием фагового лизоцима и

внутриклеточного осмотического давления происходит разрушение клеточной стенки, выход

фагового потомства в окружающую среду и лизис бактерии. Один литический цикл (от момента

адсорбции фагов До их выхода из клетки) продолжается 30.40 мин. Процесс бактериофагии

проходит несколько циклов, пока не будут ли-зированы все чувствительные к данному фагу

бактерии.

Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой характеризуется определенной степенью

специфичности. По специфичности действия различают поливалентные фаги, способные взаимо-

действовать с родственными видами бактерий, моновалентные фаги, взаимодействующие с

бактериями определенного вида, и типовые фаги, взаимодействующие с отдельными вариантами

(типами) данного вида бактерий.

Умеренные фаги лизируют не все клетки в популяции, с частью из них они вступают в

симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосому бактерии. В таком случае

геномом фага называют профаг. Профаг, ставший частью хромосо- ; мы клетки, при ее

размножении реплицируется синхронно с геном бактерии, не вызывая ее лизиса, и передается

по наследству от клетки к клетке неограниченному числу потомков. Биологическое явление

симбиоза микробной клетки с умеренным фагом (профагом) называется лизогенией, а культура

бактерий, содержащая профаг, получила название лизогенной. Это название (от греч. lysis .

разложение, genea . происхождение) отражает способность профага самопроизвольно или под

действием ряда физических и химических факторов исключаться из хромосомы клетки и

переходить в цитоплазму, т. е. вести себя как вирулентный фаг, лизирующий бактерии.

Лизогенные культуры по своим основным свойствам не отличаются от исходных, но они

невосприимчивы к повторному заражению гомологичным или близкородственным фагом и, кроме

того, приобретают дополнительные свойства, которые находятся под контролем генов

профага. Изменение свойств микроорганизмов под влиянием профага получило название

фаговой конверсии. Последняя имеет место у многих видов микроорганизмов и касается

различных их свойств: культуральных, биохимических, токсигенных, антигенных,

чувствительности к антибиотикам и др. Кроме того, переходя из интегрированного состояния

в вирулентную форму, умеренный фаг может захватить часть хромосомы клетки и при лизисе

последней переносит эту часть хромосомы в другую клетку. Если микробная клетка станет

лизогенной, она приобретает новые свойства (см. главу 5). Таким образом, умеренные фаги

являются мощным фактором изменчивости микроорганизмов.

Умеренные фаги могут нанести вред микробиологическому производству. Так, если

микроорганизмы, используемые в качестве продуцентов вакцин, антибиотиков и других

биологических веществ, оказываются лизогенными, существует опасность перехода умеренного

фага в вирулентную форму, что неминуемо приведет к лизису производственного штамма.

Практическое использование фагов. Применение фагов основано на их строгой специфичности

действия. Фаги используют в диагностике инфекционных болезней:

. с помощью известных (диагностических) фагов проводят идентификацию выделенных культур

микроорганизмов. Вслед-

ствие высокой специфичности фагов можно определить вид возбудителя или варианты (типы)

внутри вида. Фаготипирование имеет большое эпидемиологическое значение, так как

позволяет установить источник и пути распространения инфекции; . с помощью тест-культуры

можно определить неизвестный фаг в исследуемом материале, что указывает на присутствие в

нем соответствующих возбудителей.

Фаги применяют для лечения и профилактики инфекционных болезней. Производят

брюшнотифозный, дизентерийный, синегной-ный, стафилококковый фаги и комбинированные

препараты. Способы введения в организм: местно, энтерально или парентерально. Умеренные

фаги используют в генетической инженерии и биотехнологии в качестве векторов для

получения рекомбинан-тных ДНК (см. главу 6).

Глава 4 ЭКОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Экология (от греч. oikos . дом, место обитания) микроорганизмов изучает их

взаимоотношения друг с другом и с окружающей средой. Как известно, микроорганизмы

обнаруживаются в почве, воде, воздухе, на растениях, в организме человека и животных.

4.1. Микрофлора почвы

Микрофлора почвы характеризуется большим разнообразием микроорганизмов, которые

принимают участие в процессах почвообразования и самоочищения почвы, кругооборота в

природе азота, углерода и других элементов. В почве обитают бактерии, грибы, лишайники

(симбиоз грибов с цианобактериями) и простейшие.

На поверхности почвы микроорганизмов относительно мало, так как на них губительно

действуют УФ-лучи, высушивание и т. д.

Наибольшее число микроорганизмов содержится в верхнем слое почвы толщиной до 10 см. По

мере углубления в почву количество микроорганизмов уменьшается и на глубине 3.4 м они

практически отсутствуют.

Состав микрофлоры почвы меняется в зависимости от типа и состояния почвы, состава

растительности, температуры, влажности и т.д. Большинство микроорганизмов почвы способны

развиваться при нейтральном рН, высокой относительной влажности, при температуре от 25

до 45 .С.

В почве живут бактерии, способные усваивать молекулярный азот (азотфиксирующие),

относящиеся к родам Azotobacter, Azomonas, Mycobacterium и др. Азотфиксирующие

разновидности цианобактерий, или сине-зеленых водорослей, применяют для повышения

плодородия рисовых полей. Такие бактерии, как псевдомонады, активно участвуют в

минерализации органических веществ, а также восстановлении нитратов до молекулярного

азота. Кишечные бактерии (сем. Enterobacteriaceae) . кишечная палочка, возбудители

брюшного тифа, сальмонеллезов, дизентерии . могут попадать в почву с фекалиями. Однако в

почве отсутствуют условия для их размножения, и они постепенно отмирают. В чистых почвах

кишечная палочка и протей встречаются редко; обнаружение их в значительных количествах

является показателем загрязнения почвы фекалиями человека и животных и свидетельствует о

ее санитарно-эпидемиологическом неблагополучии (возможность передачи возбудителей

инфекционных заболеваний).

Почва служит местом обитания спорообразующих палочек родов Bacillus и Clostridium.

Непатогенные бациллы (Вас. megatherium, Вас. subtilis и др.) наряду с псевдомонадами,

протеем и некоторыми другими бактериями являются аммонифицирующими, составляя группу

гнилостных бактерий, осуществляющих минерализацию белков. Патогенные палочки

(возбудитель сибирской язвы, ботулизма, столбняка, газовой гангрены) способны длительно

сохраняться в почве.

В почве находятся также многочисленные представители грибов. Грибы участвуют в

почвообразовательных процессах, превращениях соединений азота, выделяют биологически

активные вещества, в том числе антибиотики и токсины. Токсинообразую-щие грибы, попадая

в продукты питания человека, вызывают интоксикации . микотоксикозы и афлатоксикозы.

Микрофауна почвы представлена простейшими, количество которых колеблется от 500 до 500

000 на 1 г почвы. Питаясь бактериями и органическими остатками, простейшие вызывают

изменения в составе органических веществ почвы.

4.2. Микрофлора воды

Микрофлора воды, являясь естественной средой обитания микроорганизмов, отражает

микробный пейзаж почвы, так как микроорганизмы попадают в воду с частичками почвы.

Вместе с тем в воде формируются определенные биоценозы с преобладанием микроорганизмов,

адаптировавшихся к условиям местонахождения, т. е. физико-химическим условиям,

освещенности, степени растворимости кислорода и диоксида углерода, содержания

органических и минеральных веществ и т. д.

В водах пресных водоемов обнаруживаются палочковидные v '(псевдомонады, аэромонады и

др.), кокковидные (микрококки) и извитые бактерии. Загрязнение воды) органическими

веществами сопровождается увеличением анаэробных и аэробных бактерий, а также грибов.

Особенно много анаэробов в иле, на дне водоемов. Микрофлора воды выполняет роль

активного фактора в процессе самоочищения ее от органических отходов, которые

утилизируются микроорганизмами. Вместе с загрязненными ливневыми, талыми и сточными

водами в озера и реки попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных

(кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтерококки, клостридии) и возбудители

кишечных инфекций . брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры, лептоспироза, энтерови-

русных инфекций и др. Поэтому вода является фактором передачи возбудителей многих

инфекционных заболеваний. Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный

вибрион, легионеллы).

Вода артезианских скважин практически не содержит микроорганизмов, обычно

задерживающихся более верхними слоями почвы. Микрофлора воды океанов и морей также

содержит различные микроорганизмы, в том числе светящиеся и галофиль-ные (солелюбивые),

например галофильные вибрионы, поражающие моллюски и некоторые виды рыбы, при

употреблении которых в пищу развивается пищевая токсикоинфекция.

4.3. Микрофлора воздуха

Микрофлора воздуха взаимосвязана с микрофлорой почвы и воды. В воздух также попадают

микроорганизмы из дыхательных путей и с каплями слюны человека и животных. Солнечные

лучи и другие факторы способствуют гибели микрофлоры воздуха. Большее количество

микроорганизмов присутствует в воздухе крупных городов, меньшее . в воздухе сельской

местности. Особенно мало микроорганизмов в воздухе над лесами, горами и морями. В

воздухе обнаруживаются кокковидные и палочковидные бактерии, бациллы и клостридии,

актиномицеты, грибы и вирусы. Много микроорганизмов содержится в воздухе закрытых

помещений, микробная обсемененность которых зависит от степени уборки помещения, уровня

освещенности, количества людей в помещении, частоты проветривания и др. Количество

микроорганизмов в 1 м3 воздуха (так называемое микробное число, или обсемененность

воздуха) отражает санитарно-гигиеническое состояние воздуха, особенно в больничных и

детских учреждениях. Косвенно о выделении патогенных микроорганизмов (возбудителей

туберкулеза, дифтерии, коклюша, скарлатины, кори, гриппа И др.)

при разговоре, кашле, чиханье больных и носителей можно судить по наличию санитарно-

показательных бактерий (золотисто-1 го стафилококка и стрептококков), так как последние

являются представителями микрофлоры верхних дыхательных путей и име-' ют общий путь

выделения с патогенными микроорганизмами, передающимися воздушно-капельным путем.

С целью снижения микробной обсемененности воздуха проводят влажную уборку помещения в

сочетании с вентиляцией и очисткой (фильтрацией) поступающего воздуха; применяют

обработку помещений лампами ультрафиолетового излучения.

4.4. Роль микроорганизмов в круговороте веществ в природе

С помощью микроорганизмов органические соединения растительного и животного

происхождения минерализуются до углерода, азота, серы, фосфора, железа и др.

Круговорот углерода. В круговороте углерода активное участие принимают растения,

водоросли и цианобактерии, фиксирую- ! щие С02 в процессе фотосинтеза, а также

микроорганизмы, разлагающие органические вещества отмерших растений и животных с

выделением СО2. При аэробном разложении органических веществ образуются СО2 и вода, а

при анаэробном брожении -кислоты, спирты, СОГ Так, при спиртовом брожении микроорганизмы

(дрожжи и др.) расщепляют углеводы до этилового спирта и диоксида углерода.

Молочнокислое брожение, вызываемое молочнокислыми бактериями, характеризуется выделением

молочной и уксусной кислот и диоксида углерода. Процессы пропионовокислого (вызываемого

пропионибактериями), маслянокислого, ацётонобутилового (вызываемых клостридиями) и

других видов брожения сопровождаются образованием различных кислот и диоксида углерода.

Круговорот азота. Атмосферный азот связывают только клубеньковые бактерии и

свободноживущие микроорганизмы почвы. Органические соединения растительных, животных и

микробных остатков подвергаются в почве минерализации микроорганизмами, превращаясь в

соединения аммония. Процесс образования аммиака при разрушении белка микроорганизмами

получил название аммонификации, или минерализации азота. Активно разрушают белок такие

бактерии, как псевдомонады, протей, бациллы, клостридии. При аэробном распаде белков

образуются диоксид углерода, аммиак, сульфаты и вода; при анаэробном . аммиак, амины,

диоксид углерода, органические кислоты, индол, скатол, сероводород. Разложение мочевины,

выделяющейся с мочой, осуществляют уробактерии, расщепляющие ее до

аммиака, диоксида углерода и воды. Образующиеся аммонийные соли в результате ферментации

бактериями органических соединений могут использоваться высшими зелеными растениями. Но

наиболее усвояемыми для растений являются нитраты . азотнокислые соли. Эти соли

появляются при распаде органических веществ в процессе окисления аммиака до азотистой, а

затем азотной кислоты. Данный процесс называется нитрификацией, а микроорганизмы, его

вызывающие, -- нитрифицирующими. Нитрифицирующие бактерии выделил и описал русский

ученый С. Н. Виноградский (1890.1892)./Нитрификация проходит в две фазы: первую фазу

осуществляют бактерии рода нитрозо-монас и др., при этом аммиак окисляется до азотистой

кислоты, образуются нитриты; во второй фазе участвуют бактерии рода нитробактер и др.,

при этом азотистая кислота окисляется до азотной и превращается в нитраты. Две фазы

нитрификации являются примером метабиоза . взаимоотношений микроорганизмов, при которых

один микроорганизм размножается, используя продукты жизнедеятельности другого

микроорганизма.

Нитраты повышают плодородие почвы, однако существует и обратный процесс: нитраты могут

восстанавливаться в результате процесса денитрификации до выделения свободного азота,

что обедняет его запас в виде солей в почве, приводя к снижению ее плодородия.

4.5. Микрофлора тела человека

Организм человека заселен (колонизирован) более чем 500 видов микроорганизмов,

составляющих нормальную микрофлору человека, находящихся в состоянии равновесия

(эубиоза) друг с другом и организмом человека. Микрофлора представляет собой стабильное

сообщество микроорганизмов, т.е. микробиоценоз. Она колонизирует поверхность тела и

полости, сообщающиеся с окружающей средой. Место обитания сообщества микроорганизмов

называется биотопом. В норме микроорганизмы отсутствуют в легких и матке. Различают

нормальную микрофлору кожи, слизистых оболочек рта, верхних дыхательных путей,

пищеварительного тракта и мочеполовой системы. Среди нормальной микрофлоры выделяют

резидентную и транзиторную микрофлору. Резидентная (постоянная) облигатная микрофлора

представлена микроорганизмами, постоянно присутствующими в организме. Транзиторная

(непостоянная) микрофлора не способна к длительному существованию в организме.

Организм человека и его нормальная микрофлора составляют единую экологическую систему.

Формирование микрофлоры новорожденных начинается с попадания микроорганизмов в про-

цессе родов на кожу и слизистые оболочки. Дальнейшее формирование микрофлоры

определяется санитарным состоянием среды, в которой проходили роды, типом вскармливания

и др. Нормальная микрофлора становится устойчивой и к концу третьего месяца жизни

сходной с микрофлорой взрослого. Количество микроорганизмов у взрослого человека

составляет около 1014 особей, причем преобладают в значительной степени облигат-ные

анаэробы.

Представители нормальной микрофлоры заключены в экзо-полисахаридно-муциновый матрикс,

образуя на слизистых оболочках и коже биологическую пленку, устойчивую к различным

воздействиям.

Микрофлора кожи имеет большое значение в распространении микроорганизмов в воздухе. В

результате десквамации (шелушения) несколько миллионов чешуек, несущих каждая по

несколько микроорганизмов, загрязняют окружающую среду. На коже и в ее более глубоких

слоях (волосяные мешочки, просветы сальных и потовых желез) анаэробов в 3.10 раз больше,

чем аэробов. Кожу колонизируют пропионибактерии, коринеформные бактерии, стафилококки,

стрептококки, дрожжи Pityrosporum, дрож-жеподобные грибы Candida, редко микрококки, Мус.

fortuitum. На 1 см2 кожи приходится менее 80 000 микроорганизмов. В норме это количество

не увеличивается в результате действия бактерицидных стерилизующих факторов кожи, в

частности в поте кожи обнаружены а-глобулин, иммуноглобулины A, G, трансферрин, лизоцим

и другие противомикробные вещества. Процесс самоочищения кожи усиливается на чисто

вымытой коже. Усиленный рост микроорганизмов происходит на грязной коже; при ослаблении

организма размножающиеся микроорганизмы определяют запах тела. Через грязные руки

происходит контаминация (загрязнение) лекарственных средств микроорганизмами кожи, что

приводит к последующей порче лекарственных препаратов.

В верхние дыхательные пути попадают пылевые частицы, нагруженные микроорганизмами,

большая часть которых задерживается в носо- и ротоглотке. Здесь растут бактероиды,

коринеформные бактерии, гемофильные палочки, пептококки, лак-тобактерии, стафилококки,

стрептококки, непатогенные нейс-серии и др. Трахея и бронхи обычно стерильны.

Микрофлора пищеварительного тракта является наиболее представительной по своему

качественному и количественному составу. При этом микроорганизмы свободно обитают в

полости пищеварительного тракта, а также колонизируют слизистые оболочки.

В полости рта обитают актиномицеты, бактероиды, бифи-добактерии, эубактерии,

фузобактерии, лактобактерии, гемофильные палочки, лептотрихии, нейссерии, спирохеты,

стрептокок-

ки, стафилококки, вейлонеллы и др. Обнаруживаются также грибы рода Candida и простейшие.

Ассоцианты нормальной микрофлоры и продукты их жизнедеятельности образуют зубной налет.

Микрофлора желудка представлена лактобациллами и дрожжами, единичными грамотрицательными

бактериями. Она несколько беднее, чем, например, кишечника, так как желудочный сок имеет

низкое значение рН, неблагоприятное для жизни многих микроорганизмов. При гастритах,

язвенной болезни желудка обнаруживаются изогнутые формы бактерий . Helicobacter pylori,

которые являются этиологическими факторами патологического процесса.

В тонкой кишке микроорганизмов больше, чем в желудке; здесь обнаруживаются

бифидобактерии, клостридии, эубактерии, лактобациллы, анаэробные кокки. Наибольшее

количество микроорганизмов накапливается в толстой кишке. В 1 г фекалий содержится до

250 млрд микробных' клеток. Около 95 % всех видов микроорганизмов составляют анаэробы.

Основными представителями микрофлоры толстой кишки являются: грампо-ложительные

анаэробные палочки (бифидобактерии, лактобациллы, эубактерии); грамположительные

спорообразующие анаэробные палочки (клостридии, перфрингенс и др.); энтерококки; грам-

отрицательные анаэробные палочки (бактероиды); грамотрица-тельные факультативно-

анаэробные палочки (кишечные палочки и сходные с ними бактерии сем. Enterobacteriaceae .

цитро-бактер, энтеробактер, клебсиеллы, протей и др.). В меньших количествах

обнаруживаются фузобактерии, пропионибактерии, вейлонеллы, пептококки, стафилококки,

синегнойная палочка, дрожжеподобные грибы, а также простейшие, вирусы, включая фаги. На

эпителии успешно растут спирохеты, нитевидные бактерии. Бифидобактерии и бактероиды

составляют 80.90 % от общего количества микрофлоры кишечника.

Важную роль в жизнедеятельности человека играет микрофлора толстой кишки . своеобразный

экстракорпоральный орган. Она является антагонистом гнилостной микрофлоры, так как

продуцирует молочную, уксусную кислоты, антибиотики и др. Известна ее роль в водно-

солевом обмене, регуляции газового состава кишечника, обмене белков, углеводов, жирных

кислот, холестерина и нуклеиновых кислот, а также продукции биологически активных

соединений . антибиотиков, витаминов, токсинов и др. Морфокинетическая роль микрофлоры

заключается в ее участии в развитии органов и систем организма; она принимает участие

также в физиологическом воспалении слизистой оболочки и смене эпителия, переваривании и

детокси-кации экзогенных субстратов и метаболитов, что сравнимо с Функцией печени.

Нормальная микрофлора выполняет, кроме того, антимутагенную роль, разрушая канцерогенные

вещества

в кишечнике. В то же время некоторые бактерии могут проду-цировать сильные мутагены.

Пристеночная микрофлора кишечника колонизирует слизистую оболочку в виде микроколоний,

образуя своеобразную биологическую пленку, состоящую из микробных тел и экзополи-

сахаридного матрикса. Экзополисахариды микроорганизмов, называемые гликокаликсом,

защищают микробные клетки от разнообразных физико-химических и биологических

воздействий. Слизистая оболочка кишечника также находится под защитой биологической

пленки.

Значительное влияние оказывает микрофлора кишечника на формирование и поддержание

иммунитета. В кишечнике содержится около 1,5 кг микроорганизмов, антигены которых

стимулируют иммунную систему. Естественным неспецифическим стимулятором иммуногенеза

является мурамилдипептид, образующийся из микрофлоры под влиянием лизоцима и других лити-

ческих ферментов, находящихся в кишечнике.

Важнейшей функцией нормальной микрофлоры кишечника является ее участие в колонизационной

резистентнос-ти, под которой понимают совокупность защитных факторов организма и

конкурентных, антагонистических и других особенностей анаэробов кишечника, придающих

стабильность микрофлоре и предотвращающих колонизацию слизистых оболочек посторонними

микроорганизмами. С целью предотвращения инфекционных осложнений, при пониженной

сопротивляемости организма и повышенном риске аутоинфекции, в случаях обширных травм,

ожогов, иммунодепрессивной терапии, трансплантации органов и тканей проводят

мероприятия, направленные на сохранение и восстановление колонизационной резис-

тентности. Исходя из этого, осуществляют селективную деко нтаминацию . избирательное

удаление из пищеварительного тракта аэробных бактерий и грибов для повышения

сопротивляемости организма к инфекционным агентам. Селективную деконтаминацию проводят

путем назначения для приема внутрь малоадсорбируемых химиопрепаратов, подавляющих

аэробную часть и не влияющих на анаэробы, например комплексное назначение ванкомицина,

гентамицина и нистатина.

Нормальная микрофлора влагалища включает бактероиды, лактобактерии, пептострептококки и

клостридии.

Представители нормальной микрофлоры при снижении сопротивляемости организма могут

вызвать гнойно-воспалительные процессы, т.е. нормальная микрофлора может стать

источником аутоинфекции, или эндогенной инфекции. Она также является источником генов,

например генов лекарственной устойчивости к антибиотикам. Кроме того, как уже было

сказано выше, кишечная микрофлора, попадая в окружающую среду, может за-

грязнять почву, воду, воздух, продукты питания и т.д. Поэтому ее обнаружение

свидетельствует о загрязнении исследуемого объекта выделениями человека.

Состояние эубиоза . динамического равновесия микрофлоры и организма человека . может

нарушаться под влиянием факторов окружающей среды, стрессовых воздействий, широкого и

бесконтрольного применения антимикробных препаратов, лучевой и химиотерапии. В

результате нарушается колонизационная резистентность. Аномально размножившиеся

микроорганизмы продуцируют токсичные продукты метаболизма . индол, скатол, аммиак,

сероводород. Такое состояние, развивающееся в результате утраты нормальных функций

микрофлоры, называется дисбактериозом или дисбиозом. При дисбактерио-зе происходят

количественные и качественные изменения бактерий, входящих в состав микрофлоры. При

дисбиозе изменения происходят и среди других групп микроорганизмов . вирусов, грибов и

др.

Дисбиоз и дисбактериоз считаются эндогенной инфекцией, возникающей чаще всего в

результате нарушения антимикробными препаратами нормальной микрофлоры.

Для восстановления нормальной микрофлоры назначают препараты пробиотики (эубиотики, см.

главу 9), полученные из лиофильно высушенных живых бактерий, представителей нормальной

микрофлоры кишечника . бифидобактерий, кишечной палочки, лактобактерии и др.

4.6. Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы

Жизнедеятельность микроорганизмов находится в зависимости от факторов окружающей среды,

которые могут оказывать бактерицидное, т.е. уничтожающее, действие на клетки или

бактерио-статическое . подавляющее размножение микроорганизмов. Мутагенное действие

приводит к изменению наследственных свойств. Физические, химические и биологические

факторы окружающей среды оказывают различное воздействие на микроорганизмы.

Влияние физических факторов. Различные группы микроорганизмов развиваются при

определенных диапазонах температур. Бактерии, растущие при низкой температуре, называют

псих-Рофилами, при средней (около 37 .С) . мезофилами, при высокой . термофилами.

К психрофильным микроорганизмам относится большая группа сапрофитов . обитателей почвы,

морей, пресных водоемов и сточных вод (железобактерии, псевдомонады, светящиеся

бактерии, бациллы). Некоторые из них могут вызывать

порчу продуктов питания на холоде. Способностью расти при низких температурах обладают и

некоторые патогенные бакте- і рий (возбудитель псевдотуберкулеза размножается при

температуре 4 .С). В зависимости от температуры культивирования свойства бактерий

меняются. Так, Serratia marcescens образуют при температуре 20.25 .С большее количество

красного пигмента (продигиозана), чем при температуре 37 .С. Синтез полисахаридов, в том

числе капсульных, активируется при более низких температурах культивирования. Интервал

температур, при котором возможен рост психрофильных бактерий, колеблется от -10 до 40 .

С, а температурный оптимум . от 15 до 40 .С, приближаясь к температурному оптимуму

мезофильных бактерий.

Мезофилы включают основную группу патогенных и условно-патогенных бактерий. Они растут в

диапазоне температур 10. 47 .С; оптимум роста для большинства из них 37 .С.

При более высоких температурах (от 40 до 90 .С) развиваются термофильные бактерии. На

дне океана в горячих сульфидных водах живут бактерии, развивающиеся при температуре 250.

300 .С и давлении 262 атм. Термофилы обитают в горячих источниках, участвуют в процессах

самонагревания навоза, зерна, сена. Наличие большого количества термофилов в почве

свидетельствует о ее загрязненности навозом и компостом. Поскольку навоз наиболее богат

термофилами, их рассматривают как показатель загрязненности почвы.

Температурный фактор учитывают при проведении стерилизации. Вегетативные формы бактерий

погибают при температуре 60 .С в течение 20.30 мин; споры . в автоклаве при 120 .С под

давлением пара.

Хорошо выдерживают микроорганизмы действие низких температур. Поэтому их можно долго

хранить в замороженном состоянии, в том* числе при температуре жидкого газа (.173 .С).

Высушивание. Обезвоживание вызывает нарушение функций большинства микроорганизмов.

Наиболее чувствительны к высушиванию патогенные микроорганизмы (возбудители гонореи,

менингита, холеры, брюшного тифа, дизентерии и др.). Более устойчивыми являются

микроорганизмы, защищенные слизью мокроты. Так, бактерии туберкулеза в мокроте

выдерживают высушивание до 90 дней. Устойчивы к высушиванию некоторые капсуло- и

слизеобразующие бактерии. Но особой устойчивостью обладают споры бактерий.

Высушивание под вакуумом из замороженного состояния . лиофилизацию . используют для

продления жизнеспособности, консервирования микроорганизмов. Лиофилизированные культуры

микроорганизмов и иммунобиологические препараты длительно (в течение нескольких лет)

сохраняются, не изменяя своих первоначальных свойств.

Действие излучения. Неионизирующее излучение . ультрафиолетовые и инфракрасные лучи

солнечного света, а также ионизирующее излучение . гамма-излучение радиоактивных веществ

и электроны высоких энергий губительно действуют на микроорганизмы через короткий

промежуток времени. УФ-лучи применяют для обеззараживания воздуха и различных предметов

в больницах, родильных домах, микробиологических лабораториях. С этой целью используют

бактерицидные лампы УФ-излучения с длиной волны 200.450 нм.

Ионизирующее излучение применяют для стерилизации одноразовой пластиковой

микробиологической посуды, питательных сред, перевязочных материалов, лекарственных

препаратов и др. Однако имеются бактерии, устойчивые к действию ионизирующих излучений,

например Micrococcus radiodurans была выделена из ядерного реактора.

Действие химических веществ. Химические вещества могут оказывать различное действие на

микроорганизмы: служить источниками питания; не оказывать какого-либо влияния;

стимулировать или подавлять рост. Химические вещества, уничтожающие микроорганизмы в

окружающей среде, называются дезинфицирующими. Процесс уничтожения микроорганизмов в

окружающей среде называется дезинфекцией. Антимикробные химические вещества могут

обладать бактерицидным, вирулицид-ным, фунгицидным действием и т.д.

Химические вещества, используемые для дезинфекции, относятся к различным группам, среди

которых наиболее широко представлены вещества, относящиеся к хлор-, йод- и бромсо-

держащим соединениям и окислителям. В хлорсодержащих препаратах бактерицидным действием

обладает хлор. К этим препаратам относят хлорную известь, хлорамины, пантоцид, неопан-

тоцид, натрия гипохлорит, гипохлорит кальция, дезам, хлорде-зин, сульфохлорантин и др.

Перспективными антимикробными препаратами на основе йода и брома считаются йодопирин и

дибромантин. Интенсивными окислителями являются перекись водорода, калия перманганат и

др. Они оказывают выраженное бактерицидное действие.

К фенолам и их производным относят фенол, лизол, лизо-ид, креозот, креолин, хлор-р-

нафтол и гексахлорофен.

Выпускаются также бактерицидные мыла: феноловое, дегтярное, зеленое

медицинское, ²Гигиена⌡. Мыло ²Гигиена⌡ содержит 3.5% гексахлорофена, обладает наилучшими

бактерицидными свойствами и рекомендуется для мытья рук сотрудников инфекционных

больниц, родильных домов, детских учреждений, предприятий общественного питания и

микробиологических лабораторий.

Антимикробным действием обладают также кислоты и их соли (оксолиновая, салициловая,

борная); щелочи (аммиак и его соли,

бура); спирты (70.80. этанол и др.); альдегиды (формальдегид, р-пропиолактон).

Перспективной группой дезинфицирующих веществ являются поверхностно-активные вещества,

относящиеся к четвертичным соединениям и амфолитам, обладающие бактерицидными, моющими

свойствами и низкой токсичностью (ниртан, амфо-лан и др.).

Для дезинфекции точных приборов (например, на космических кораблях), а также

оборудования и аппаратуры используют газовую смесь из оксида этилена с метилбромидом.

Дезинфекцию проводят в герметических условиях.

Влияние биологических факторов. Микроорганизмы находятся друг с другом в различных

взаимоотношениях. Совместное существование двух различных организмов называется

симбиозом (от греч. simbiosis . совместная жизнь). Различают несколько вариантов

полезных взаимоотношений: метабиоз, мутуализм, комменсализм, сателлизм.

Метабиоз . взаимоотношение между микроорганизмами, при котором один микроорганизм

использует для своей жизнедеятельности продукты жизнедеятельности другого организма.

Метабиоз характерен для почвенных нитрифицирующих бактерий, использующих для метаболизма

аммиак . продукт жизнедеятельности аммонифицирующих почвенных бактерий.

Мутуализм . взаимовыгодные взаимоотношения между разными организмами. Примером

мутуалистического симбиоза являются лишайники . симбиоз гриба и сине-зеленой водоросли.

Получая от клеток водоросли органические вещества, гриб в свою очередь поставляет им

минеральные соли и защищает от высыхания.

Комменсализм (от лат. commensalis . сотрапезник) . сожительство особей разных видов, при

котором выгоду из симбиоза извлекает один вид, не причиняя другому вреда. Комменсалами

являются бактерии, представители нормальной микрофлоры человека.

Сателлизм . усиление роста одного вида микроорганизма под влиянием другого

микроорганизма. Например, колонии дрожжей или сарцин, выделяя в питательную среду

метаболиты, стимулируют рост вокруг них колоний микроорганизмов. При совместном росте

нескольких видов микроорганизмов могут активизироваться их физиологические функции и

свойства, что приводит к более быстрому воздействию на субстрат.

Антагонистические взаимоотношения, или антагонистический симбиоз, выражаются в виде

неблагоприятного воздействия одного вида микроорганизма на другой, приводящего к

повреждению и даже к гибели последнего. Микроорганизмы-антагонисты распространены в

почве, воде и организме

человека и животных. Хорошо известна антагонистическая активность представителей

нормальной микрофлоры толстого кишечника человека . бифидобактерий, лактобацилл,

кишечной палочки и др., являющихся антагонистами гнилостной микрофлоры.

Механизм антагонистических взаимоотношений разнообразен, распространенной формой

антагонизма является образование антибиотиков . специфических продуктов обмена

микроорганизмов, подавляющих развитие микроорганизмов других видов. Существуют и другие

проявления антагонизма, например большая скорость размножения, продукция бактериоцинов,

в частности колицинов, продукция органических кислот и других продуктов, изменяющих рН

среды.

Антагонизм может развиваться в форме конкуренции в основном за источники питания:

интенсивно развиваясь и истощая питательную среду, микроорганизм-антагонист подавляет

рост других микроорганизмов. При хищничестве микроорганизм, например амеба кишечника,

захватывает и переваривает бактерии кишечника. Наконец, такая форма антагонизма, когда

микроорганизм использует другой организм как источник питания, называется паразитизмом.

Примером паразитизма является взаимоотношение бактериофага и бактерии.

4.7. Микрофлора растительного лекарственного сырья, фитопатогенные микроорганизмы,

микробиологический контроль лекарственных средств

Растительное лекарственное сырье может обсеменяться микроорганизмами в процессе его

получения: инфицирование происходит через воду, нестерильную аптечную посуду, воздух

производственных помещений и руки персонала. Обсеменение происходит также за счет

нормальной микрофлоры растений и фи-топатогенных микроорганизмов . возбудителей

заболеваний растений. Фитопатогенные микроорганизмы способны распространяться и заражать

большое количество растений.

Микроорганизмы, развивающиеся в норме на поверхности растений, относятся к эпифитам

(греч. ері . над, phyton . растение). Они не наносят вреда, являются антагонистами

некоторых фитопатогенных микроорганизмов, растут за счет обычных выделений растений и

органических загрязнений поверхности растений. Эпифитная микрофлора препятствует

проникновению фитопатогенных микроорганизмов в растительные ткани, усиливая тем самым

иммунитет растений. Наибольшее количество эпифитной микрофлоры составляют

грамотрицательные

бактерии Erwinia herbicola, образующие на мясопептонном агаре золотисто-желтые колонии.

Эти бактерии являются антагонистами возбудителя мягкой гнили овощей. Обнаруживают в

норме и другие бактерии . Pseudomonas fluorescens, реже Bacillus mesentericus и

небольшое количество грибов. Микроорганизмы находятся не только на листьях, стеблях, но

и на семенах растений. Нарушение поверхности растений и их семян способствует накоплению

на них большого количества пыли и микроорганизмов. Состав микрофлоры растений зависит от

вида, возраста растений, типа почвы и температуры окружающей среды. При повышении

влажности численность эпифитных микроорганизмов возрастает, при понижении влажности .

уменьшается.

В почве, около корней растений, находится значительное количество микроорганизмов. Эта

зона называется ризосферой (от греч. rhiza . корень, sphaira . шар). В ризосфере часто

присутствуют неспорообразующие бактерии (псевдомонады, мико-бактерии и др.), встречаются

также актиномицеты, спорообра-зующие бактерии и грибы. Микроорганизмы ризосферы

переводят различные субстраты в соединения, доступные для растений, синтезируют

биологически активные соединения (витамины, антибиотики и др.), вступают в

симбиотические взаимоотношения с растениями, обладают антагонистическими свойствами

против фитопатогенных бактерий.

Микроорганизмы поверхности корня растений (микрофлора ризопланы) в большей степени, чем

ризосфера, представлены псевдомонадами. Симбиоз мицелия грибов с корнями высших растений

называют микоризой (т.е. грибокорнем) (от греч. mykes . гриб, rhiza . корень). Микориза

улучшает рост растений. Растения окультуренных почв в большей степени загрязнены

микроорганизмами, чем растения лесов и лугов. Особенно много микроорган'измов содержится

в нижней прикорневой части растений, что связано с попаданием микроорганизмов из почвы.

В большом количестве обнаруживаются микроорганизмы на растениях, растущих на полях

орошения, свалках, вблизи складирования навоза, в местах выпаса скота. При этом растения

могут загрязняться патогенными микроорганизмами и при неправильной заготовке могут быть

хорошей питательной средой для размножения микроорганизмов. Одним из способов,

препятствующих их росту на растениях, является процесс высушивания растений.

К фитопатогенным микроорганизмам относят бактерии, вирусы и грибы. Болезни, вызываемые

бактериями, называют бактериозами. Среди возбудителей бактериозов встречаются

псевдомонады, микобактерии, эрвинии, коринебактерии, агробакте-рии и др. К бактериозам

относятся различные виды гнилей, некрозы тканей, увядание растений, развитие опухолей и

др.

Различают общие и местные бактериозы. Общие бактериозы вызывают гибель всего растения

или его отдельных частей. Они могут проявляться на корнях (корневые гнили) или в

сосудистой системе растений. Местные бактериозы ограничиваются поражением отдельных

участков растений, проявляясь на парен-химных тканях.

Род Erwinia включает виды, вызывающие болезни типа ожога, увядания, мокрой или

водянистой гнили, например E.amylo-vora . возбудитель ожога яблонь и груш, Е.

carotovora . возбудитель мокрой бактериальной гнили.

К роду Pseudomonas относят различные виды, в частности вызывающие бактериальную

пятнистость (P. syringae и др.), при этом на листьях образуются пятна разной окраски и

размеров в зависимости от видов растений.

Бактерии рода Xanthomonas поражают листья, вызывая пятнистость; проникая в сосудистую

систему растения, закупоривая ее элементы, они вызывают гибель растения. Различают

возбудителей сосудистого бактериоза . X. campestris, туберкулеза . X. beticola, черной

бактериальной пятнистости . X. vesi-

catoria и др.

Представители рода Corynebacterium вызывают сосудистые и паренхиматозные заболевания

растений. Гликопептиды этих бактерий повреждают клеточные мембраны сосудов, в результате

чего происходит закупорка сосудов и гибель растения. Они поражают растения из семейства

разноцветных и бобовых (С. fa-scians), вызывают увядание растений семейства бобовых (С.

insi-diosum), бактериальный рак (С. rnichidanense).

Агробактерии способствуют развитию различных опухолей у растений. Образование опухолей

вызывается онкогенной плазми-дой, передающейся агробактериями в растительные клетки. Эти

бактерии вызывают у растений образование корончатых галлов . опухолей. После развития

опухоли агробактерии в тканях обычно отсутствуют.

Передача возбудителей бактериозов происходит через зараженные семена, остатки больных

растений, почву, воду, воздух, путем переноса насекомыми, моллюсками, нематодами.

Бактерии проникают в растения через устьица, нектарники и другие части растений, а также

даже через небольшие повреждения. При проникновении бактерий внутрь растений происходит

повреждение растительных клеток, они мацерируются и отслаиваются друг от друга. Такой

путь проникновения называется интрацел-люлярным и межклеточным, а заболевания .

паренхиматозными. В случаях распространения и размножения бактерий в сосудистых пучках

происходит как бы закупоривание их просвета бактериальной массой. В результате этого

процесса и действия бактериальных токсинов растения увядают.

Вирусы, вызывающие болезни растений, делят на возбудителей мозаики и желтухи. При

мозаичной болезни растений появляется мозаичная (пятнистая) расцветка пораженных листьев

и плодов, растения отстают в росте. Желтуха проявляется карликовостью растений,

измененными многочисленными боковыми побегами, цветками и т.д.

Грибы, поражающие растения, могут в случае приготовления из пораженного зерна продуктов

питания вызывать пищевые отравления . микотоксикозы. Примером микотоксикоза является

эрготизм - - заболевание, возникающее при употреблении продуктов, приготовленных из

зерна, зараженного спорыньей (гриб Claviceps purpurea). Гриб поражает в поле колоски

злаковых: образуются склероции гриба, называемые рожками.

В условиях повышенной влажности, низкой температуры на вегетирующих или скошенных

растениях могут развиваться грибы родов Fusarium, Penicillium, Aspergillus и др.,

вызывающие у людей микотоксикозы.

Для борьбы с фитопатогенными микроорганизмами проводят следующие мероприятия:

возделывание выносливых растений, очистку и обработку семян, обеззараживание почвы,

удаление пораженных растений, уничтожение переносчиков возбудителей болезней, обитающих

на растениях.

Микробиологический контроль лекарственных средств. Обсеменение лекарственного сырья

возможно на всех этапах его заготовки и при хранении. Активному размножению

микроорганизмов способствует увлажнение растений и растительного сырья. Размножившиеся

микроорганизмы вызывают изменение фармакологических свойств препаратов, полученных из

лекарственных растений. Микроорганизмы могут- также попадать из окружающей среды, от

людей и обсеменять лекарственные препараты в процессе их изготовления из растительного

сырья. Для соблюдения санитарного режима изготовления лекарственных препаратов проводят

санитарно-микробиологический контроль объектов окружающей среды предприятия и каждой

серии выпускаемой лекарственной формы. Лекарственные средства для парентерального

введения в виде инъекций, глазные капли, мази, пленки и др., в отношении которых имеются

соответствующие указания в нормативно-технической документации, должны быть стерильными.

Контроль стерильности лекарственных средств проводят путем посева на тиогликолевую среду

для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов; при посеве на среду Сабуро

выявляют грибы, главным образом рода Candida. Стерильность лекарственных средств с

антимикробным действием определяют путем мембранной фильтрации: фильтр после фильтрации

исследуемого препарата делят на части и вносят для подращивания задержанных

микроорганизмов в

жидкие питательные среды. При отсутствии роста препарат считается стерильным.

Лекарственные средства, не требующие стерилизации, обычно содержат микроорганизмы,

поэтому их испытывают на микробиологическую чистоту: проводят количественное определение

жизнеспособных бактерий и грибов в 1 г или 1 мл препарата, а также выявляют

микроорганизмы (бактерии семейства энтеро-бактерий, синегнойная палочка, золотистый

стафилококк), которые не должны присутствовать в нестерильных лекарственных средствах. В

1 г или 1 мл лекарственного сырья для приема внутрь должно быть не более 1000 бактерий и

100 дрожжевых и плесневых грибов. В случаях местного применения (полость уха, носа,

интравагинальное использование) количество микроорганизмов не должно превышать 100

(суммарно) микробных клеток на 1 г или 1 мл препарата. В таблетированных препаратах не

должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тыс.

микробных клеток на таблетку.

4.8. Цель, задачи и методы санитарной микробиологии

Санитарная микробиология . раздел медицинской микробиологии, изучающий микроорганизмы,

содержащиеся в окружающей среде и способные оказывать неблагоприятное воздействие на

состояние здоровья человека. Она разрабатывает микробиологические показатели

гигиенического нормирования, методы контроля за эффективностью обеззараживания объектов

окружающей среды, а также выявляет в объектах окружающей среды патогенные, условно-

патогенные и санитарно-показательные

микроорганизмы.

Обнаружение патогенных микроорганизмов позволяет дать оценку эпидемиологической ситуации

и принять соответствующие меры по борьбе и профилактике инфекционных заболеваний.

Условно-патогенные микроорганизмы могут попадать в продукты питания, быстро размножаться

с накоплением большого количества микробных клеток и их токсинов, вызывая пищевые

отравления микробной этиологии. Санитарно-показательные микроорганизмы используют в

основном для косвенного определения возможного присутствия в объектах окружающей среды

патогенных микроорганизмов, они непосредственно могут свидетельствовать о загрязнении

объекта выделениями человека и животных, содержащими микроорганизмы. Например,

возбудители кишечных инфекций имеют общий путь выделения (с фекалиями) с такими

санитарно-показатель-ными бактериями, как бактерии группы кишечной палочки .

БГКП (в эту группу, кроме кишечной палочки, входят сходные по свойствам бактерии рода

Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella), энтерококки, клостридии перфрингенс; возбудители

воздушно-капельных инфекций имеют общий путь выделения с бактериями, постоянно

обитающими на слизистой оболочке верхних дыхательных путей, выделяющимися в окружающую

среду при кашле, чиханье, разговоре. В связи с этим в качестве санитар-но-показательных

бактерий для воздуха закрытых помещений предложены гемолитические стрептококки и

золотистые стафилококки.

Загрязненность почвы, воды, воздуха, продуктов питания и других объектов выделениями

человека или животных определяют путем количественного учета санитарно-показательных

микроорганизмов. В воздухе регистрируют количествололотисто-го стафилококка и

стрептококков, в воде . кишечной палоч^ ки, БГКП, энтерококка, в почве . кишечной

палочки, БГКП, клостридии перфрингенс, в продуктах питания . кишечной палочки,

БГКГҐ, 'энтерококка, золотистого стафилококка, протея. На основании количественного

выявления санитарно-показательных микроорганизмов вычисляются коли-титр, перфрингенс-

титр, титр энтерококка и т.д. Так, например, коли-титр или титр энтерококка воды . это

наименьшее количество воды, в котором определяется кишечная палочка или энтерококк.

Показателем загрязненности воды является также коли-индекс . число кишечных палочек в 1

л воды.

Часто вместо коли-титра определяются титр БГКП, к которым относят все грамотрицательные

палочки, сбраживающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу при температуре

37.0,5 .С в течение 24.48 ч и не обладающие оксидазной активностью. Наиболее часто этот

показатель применяют как индикатор фекального загрязнения воды. При бактериальном

загрязнении воды свыше допустимых норм следует провести дополнительное исследование на

наличие бактерий . показателей свежего фекального загрязнения. К таким бактериям относят

кишечную палочку, способную расщеплять лактозу до кислоты и газа при температуре 43.44 .

С в присутствии ингибиторов роста (борная кислота) и не растущую на цитратной среде. О

свежем фекальном загрязнении свидетельствует также выявление энтерококка. На старое

фекальное загрязнение указывают отсутствие БГКП и наличие определенного количества

клостридии перфрингенс, т. е. наиболее устойчивых спорообразующих бактерий. Кроме

определения патогенных, условно-патогенных и санитарно-показательных микроорганизмов, в

практике санитарно-микробиологических исследований используется определение микробного

числа, т..£. общего количества микроорганизмов в определенном объеме или определенной

массе исследуемого

материала (вода, почва, продукты питания, лекарственная форма и др.).

Санитарный надзор за состоянием объектов общественного питания, аптек, лечебных и

детских учреждений осуществляется исследованием смывов с рук персонала, посуды,

поверхности столов, оборудования и др. Смыв высевают на различные питательные среды для

определения микробной обсемененности, наличия БГКП, патогенных энтеробактерий,

золотистого стафилококка, грибов рода Candida и энтеровирусов.

Глава 5 ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ

Генетика микроорганизмов как учение о наследственности и изменчивости имеет характерные

особенности, соответствующие их строению и биологии. Наиболее изучена генетика бактерий,

характерными чертами которых являются малые размеры и большая скорость размножения

бактериальной клетки, что позволяет проследить генетические изменения в течение

небольшого промежутка времени на большом числе популяций. Бактериальная клетка имеет

одинарный набор генов (нет аллелей). Хромосома бактерий является полинуклеотидом (две

полинуклеотидные цепочки ДНК) длиной 1000 мкм и мол. массой около 1,5.2-10'Д. Она

суперспирализована и замкнута в кольцо: содержит от 3000 до 5000 генов. Аналогично

хромосоме в цитоплазме бактерий располагаются ковалентне замкнутые кольца ДНК,

называемые плазмидами (внехромосомные факторы наследственности). Масса плазмид

значительно меньше массы хромосом. Хромосома и плазмида способны к автономному

самокопированию . репликации, по

← Предыдущая страница | Следующая страница →